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多肽的溶解与保存

建议先用少量肽来试验最适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入溶液并将之稀释至最终浓度。即先溶解,后加入缓冲液。注意:总是将多肽加入到适当溶剂中搅拌,而不能采用其它方式。
 
冻干多肽的溶解
多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成。虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除了最短的肽链外,该现象发生在几乎所有肽链,与极性无关。因此,溶解多肽的第一个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水(如果条件允许则用无氧水)。多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生,多肽应溶解在无菌的蒸馏水中,或者用0.45或0.2µm孔径的滤膜过滤除菌。包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化,因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意:超声处理会引起溶液发热和多肽降解。

冻干多肽的保存
所有标明“保持冻干”的产物, 都必须保存在冰冻条件下,最好 -20℃,若保存在-80℃以下,大多数肽可维持几年的活性。
当使用冰冻产品时,开盖之前, 瓶或试管应在装有新鲜干燥剂的干燥箱内升至室温。对于保存于-20℃的产品, 这个过程需要一小时或更长, 随包装大小而异。否则,当瓶打开时,水气进入导致多肽凝缩而降低其稳定性。一旦打开, 应迅速称量完毕, 并立即密闭以免潮解, 尤其亲水肽更应注意。

多肽溶液的保存
多肽溶液比干粉的稳定性差很多,为了得到最好结果,遵循下列原则:
 1. 反复冻融有损于肽的活性, 所以建议分装成小包装保存,需要多少解冻多少,用后剩余者弃掉。
 2. 溶于PH5-7无菌的缓冲液中, 贮存于-20℃。
 3. 包含Cys、Met、Typ、Glu、Asp的多肽易于氧化, 因此须保存在无氧化剂的环境中。
 4.由于细菌能降解多肽, 因此贮存前必须过滤除菌 。
 

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